Chemické pokusy/Izolace DNA

Z Wikiknih
Skočit na navigaci Skočit na vyhledávání
Izolace DNA
Jméno pokusu Izolace DNA
Chemikálie biologický materiál, ethanol, chlorid sodný, detergent a destilovaná voda
Některá data mohou pocházet z datové položky.

Popis[editovat]

Deoxyribonukleová kyselina (DNA) je nukleová kyselina, která je nositelkou genetické informace všech organismů s výjimkou některých nebuněčných, u nichž hraje tuto úlohu RNA (např. RNA viry). Po chemické stránce je DNA lineární makromolekula, jejíž dva komplementární řetězce jsou k sobě připoutané vodíkovými můstky. Z biologického materiálu lze DNA snadno izolovat i v domácích podmínkách.

Postup[editovat]

  1. Před provedením experimentu je třeba vychladit ethanol v mrazáku.
  2. Do mixeru umístíme biologický materiál (o objemu asi 100 ml), přidáme 2 g chloridu sodného a 200 ml destilované vody. Směs rozmixujeme, dojde k oddělení buněk od sebe. Sůl přidáváme pro podporu denaturace bílkovin.
  3. Zhomogenizovanou směs přefiltrujeme na filtrační aparatuře.
  4. Do filtrátu přidáme asi 30 ml detergentu a zamícháme. Počkáme 5-10 minut. Dojde k desintegraci buněk. EDTA v detergentu inhibuje enzymy obsahující kovy, z nichž některé jsou schopné poškodit DNA.
  5. Převedeme asi 3 ml směsi do zkumavky. Následně do zkumavky po stěně pod úhlem asi 45° přilijeme 3 ml vychlazeného ethanolu. Nemícháme. Alkohol vytvoří vrstvu nad hladinou vody. Na rozhraní vody a ethanolu dojde k vysrážení DNA. DNA vytáhneme pomocí špejle.